提取心肌組織細胞內(nèi)線粒體(tǐ)的(de)方案

  提取新鮮心肌組織細胞內(nèi)線粒體(tǐ)的(de)方案：

  心肌組織切碎後在4 ℃介質（0.25mol/L蔗糖、10 mmol/L Tris-HCl pH7.4，0-4℃）中制(zhì)備心肌組織勻漿。勻漿經750g、離(lí)心10 mi↕n後留上(shàng)清，以9000 g離(lí)心20min 後留沉澱，重新懸浮後以9000 g再離(×lí)心20 min，棄上(shàng)清得(de)線粒體(tǐ).全部操作(zuò)于4 ℃進行(xíng)。
培養細胞提取線粒體(tǐ).細胞棄去(qù)培養液後，用(yòng)細胞收集液作(zuò)用(yòng)2到(dào)3 min，用(yòng)scraper,将細胞收集起來(lái)，6 000 g離(lí)心15 min。棄上(shàng)清，之後加細胞勻漿液，用(yòng)勻漿器(qì)或手動勻漿管勻漿，将裝有(yǒu)勻漿液的(de)離(lí)心管配平後放(fàng)入普通(×tōng)離(lí)心機(jī)，以2500 rpm，離(lí)心15 min,緩緩取上(shàng)清液，移入高(gāo)速離(lí)心管中，保∞存于有(yǒu)冰塊的(de)燒杯中.以17000 rpm離(lí)心20 min，棄上(shàng)清，留取沉澱物(wù)。加入0．25mol/L蔗糖與0．003 'mol/L氯化(huà)鈣液l ml，用(yòng)吸管吹打成懸液，以17000 rpm離(lí)心20∞ min，将上(shàng)清吸入另一(yī)試管中，留取沉澱物(wù)，加入0.1ml 0．25mol/L蔗糖與0.003mol/L氯化(huà)鈣溶液混勻¥成懸液.即得(de)線粒體(tǐ)。